腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备

• 作者: 孙强 胡世颉 轩东英 轩昆 金岩 金明
• 来源期刊: 临床口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MCPR1基因 原核表达 融合蛋白 多克 隆抗体
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 469-472
• 页数: 4页
• 分类号: R782.2|Q786
• 字数: 3579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-1634.2004.08.009

摘要

目的:MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体.方法:采用多聚酶链式反应(PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX-T-e asy,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-MCPR1 ,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-MCPR1融合蛋白,进行初步纯化及SDS-PAGE 电泳,直接割胶,将其作为抗原免疫兔子.结果:成功构建融合表达载体pGEX-4T-MCP R1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,初步纯化得到多克隆抗体.Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性,ELISA分析证实其效价为106.结论:MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金岩	第四军医大学口腔医学院组织病理教研室	425	2480	19.0	25.0
5	金明	第四军医大学生物化学教研室	29	124	6.0	9.0
6	胡世颉	第四军医大学西京医院神经外科	49	322	11.0	15.0
7	轩东英	第四军医大学口腔医学院组织病理教研室	14	52	5.0	6.0
11	轩昆	第四军医大学口腔医学院组织病理教研室	48	137	6.0	8.0
15	孙强	第四军医大学遗传与发育教研室	28	131	7.0	10.0