HLA-A*0207重链胞外区原核表达载体的构建及表达

• 作者: 何贤辉 刘毅 徐丽慧 曾耀英 蔡小嫦
• 来源期刊: 暨南大学学报(自然科学与医学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类白细胞抗原 cDNA克隆 融合蛋白 包涵体
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 413-419
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 3922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2004.04.004

摘要

目的:克隆HLA-A*0207(A2)重链基因,构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BirA substrate peptide, BSP)的A2重链胞外区原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达.方法:以RT-PCR方法从HLA-A2+供者白细胞中克隆A2基因并进行DNA测序,并以PCR方法构建在羧基端融合BSP的A2重链胞外区表达载体,在大肠杆菌BL21(ED3)中进行表达.结果:从31名HLA-A2+供者白细胞中克隆到的基因经DNA测序显示,只有从供者2得到的基因是HLA-A*0207.将编码该基因编码重链胞外区1-275的序列和编码BSP的序列融合,构建融合蛋白表达载体,并以测序验证.融合蛋白在BL21(ED3)中获得高效表达,产物相对分子质量为35 000,约占菌体总蛋白的30%,主要存在于包涵体中,对包涵体进行洗涤后得到纯度为80%的重组蛋白.结论:成功克隆HLA-A*0207基因,构建了其胞外区和BSP融合蛋白表达载体并在大肠杆菌中获得高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾耀英	暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室	300	2350	22.0	32.0
2	徐丽慧	暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室	69	509	13.0	20.0
6	何贤辉	暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室	98	770	16.0	23.0
7	蔡小嫦	暨南大学第一附属医院皮肤科	40	341	11.0	17.0
8	刘毅	暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室	17	129	6.0	11.0