人VEGF-C基因荧光真核表达载体的构建和表达

• 作者: 丁兆习 刘执玉 李贵宝 毕玉顺 田铧 董平 高杰
• 来源期刊: 中国现代普通外科进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管内皮生长因子·真核细胞·杂合子·基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 212-214
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 3381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9905.2004.04.008

摘要

目的:构建含有绿色荧光蛋白基因的人血管内皮生长因子C基因的真核表达载体,检测该基因在真核细胞中的表达,研究VEGF-C基因在淋巴管生成中的作用.方法:含有绿色荧光蛋白基因的质粒pEGFP-1通过末端平滑化,酶切获得5'(粘端)BamHI-EGFP-XbaI(平端)3'片断,已经构建的VEGF-C表达载体pcDNA3.1/VEGF-C通过末端平滑化,酶切获得5'-(粘端)BamHI-pcDNA3.1-目的基因-KpnI(平端)3',两片段连接构建含有绿色荧光蛋白的真核表达载体,琼脂糖凝胶电泳并测序检测插入片段的正确性.将该载体通过脂质体转染到真核细胞CHO中,观察绿色荧光蛋白在CHO细胞中的表达情况.通过G418筛选阳性转染细胞,提取总RNA,行RT-PCR,PCR产物琼脂糖凝胶电泳观察VEGF-C基因在CHO细胞中的表达情况.结果:琼脂糖凝胶电泳证实了插入EGFP片段的大小,测序结果证实了插入片段的正确性,CHO细胞中看到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR产物中含有VEGF-C cDNA.结论:成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的VEGF-C真核表达载体并检测到在真核细胞CHO中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田铧	山东大学医学院解剖学教研室	37	221	8.0	13.0
2	刘执玉	山东大学医学院解剖学教研室	53	244	8.0	13.0
3	丁兆习	山东大学医学院解剖学教研室	17	81	6.0	8.0
4	李贵宝	山东大学医学院解剖学教研室	29	142	7.0	11.0
5	高杰	山东大学医学院解剖学教研室	22	149	6.0	11.0
6	董平	山东大学医学院解剖学教研室	10	58	5.0	7.0
7	毕玉顺	山东大学医学院解剖学教研室	22	129	6.0	9.0