中国主要问号钩端螺旋体血清群外膜蛋白OmpL1的基因型,原核表达系统构建表达及免疫学鉴定

• 作者: 严杰 徐飏 李淑萍 李立伟 毛亚飞
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体 OmpL1基因 属特异性蛋白抗原 克隆表达 免疫性鉴定 交叉凝集 黏附阻断
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 439-444
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4992字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.06.007

摘要

目的探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因,克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性. 方法常规酚-氯仿法提取上述钩体的基因组DNA,高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统,不同浓度IPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白rOMPL1表达情况.分别用兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.分别用显微镜凝集试验(MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPL1血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用. 结果上述17株钩体均具有OmpL1基因,但至少可分3种基因型:OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3.与文献报道比较,所克隆的OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3基因核苷酸序列同源性分别为93.87%～94.08%、89.82%～100%和80.89%～81.72%,其氨基酸序列同源性分别为93.13%～98.75%、91.87%～100%和85.63%～88.44%.IPTG诱导后pET32a-OmpL1/1-E.coliBL21DE3和pET32a-OmpL1/2-E.coliBL21DE3的rOMPL1/1和rOMPL1/2表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%.rOMPL1/1和rOMPL1/2均能与兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原血清发生免疫结合反应,免疫家兔可获得抗体.兔抗rOMPL1/1和rOMPL1/2血清对上述17株钩体的MAT效价为1∶2～1∶32,1∶2～1∶16稀释时均能有效地阻断钩体黏附J744A.1细胞. 结论所检测的钩体均有OmpL1基因,但至少可分为3种不同的基因型.所构建的原核表达系统表达的rOMPL1/1和rOMPL1/2具有良好的免疫原性和免疫反应性.rOMPL1/1和rOMPL1/2具有属特异性、钩体表面的膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集抗体,并具有钩体黏附阻断的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐飏	华中科技大学同济医学院病原生物学系	4	33	4.0	4.0
5	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
6	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
7	李立伟	浙江大学医学院病原生物学教研室	34	277	7.0	15.0
8	李淑萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	16	109	6.0	10.0