人血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及真核表达

• 作者: 余细勇 刘媛 单志新 林曙光 林秋雄 符永恒 谭虹虹 郑猛
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: canstatin 克隆,分子 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（z1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4-6
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2361字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2004.z1.100

摘要

[目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有生物活性的canstatin.[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatincDNA,并定向克隆入真核表达载体pSecTag2C中.用脂质体转染法,将重组质粒pSecTag2C-canstatin转入COS7细胞.培养48h后,对转化的COS7细胞行PCR和Western-blot鉴定,用MTT法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用.[结果]从人脐静脉血管内皮细胞中扩增出canstatincDNA片段.测序结果显示,克隆的canstatincDNA长684bp,序列与文献报道一致.从pSecTag2C-canstatin转化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段,Western-blot结果显示,转化的COS7细胞中有特异的34kDa的canstatin表达.MTT检测显示,表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖.[结论]构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin,在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin.