酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库

• 作者: 刘新光 梁念慈 梁景耀 黄功华
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: 酵母细胞 HL-60细胞 cDNA文库 SMART技术 同源重组
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2004.01.001

摘要

目的:以酵母穿梭表达质粒pGADT7-Rec为载体,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.方法:从体外培养的HL-60细胞中提取总RNA,利用经修饰的CDSⅢ引物合成cDNA第一链,在链的末端可自动延伸CCC,在反应体系中加入SMART ⅢTMOligo作为cDNA第二链合成的引物,进行长距离(LD)-PCR合成双链cDNA,后者经CLONTECH CHROMA SPIN+TE-4000柱纯化后,与线性质粒pGADT7-Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环行的有复制活性的文库质粒,在缺亮氨酸(LEU)培养板上筛选出所有克隆,即为人HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.结果:共获得1.03×106转化子,文库扩增后,插入cDNA长度在0.1 kb～1.5 kb之间.结论:在酵母细胞中利用CLONTECH SMART技术成功构建了HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	刘新光	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	166	878	14.0	23.0
3	黄功华	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	11	80	5.0	8.0
4	梁景耀	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	12	97	6.0	9.0