卡介苗D2株分泌蛋白基因植物表达载体的构建

• 作者: 俞守义 刘凤娟 吴敏 朱丽 李建栋 李志锋 江晓玲 聂军 芮勇宇 陈清
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 生物学
• 关键词: 卡介苗 32-kDa蛋白 fbpA 克隆 DNA序列分析 重组 植物表达载体
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1193-1195
• 页数: 3页
• 分类号: Q781|Q784
• 字数: 2077字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-0580.2004.10.016

摘要

目的克隆卡介苗(BCG)D2株32-kDa分泌蛋白基因(fbpA基因),构建重组植物表达载体pBI121-fbpA,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础.方法采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因,构建重组克隆载体pUCm-T-fbpA,经过单菌落PCR法、BamHⅠ、SacⅠ和HindⅢ单双酶切、DNA序列分析鉴定后,将fbpA基因亚克隆入植物表达载体pBI 121,得到重组载体pBI 121-fbpA,并转化根癌农杆菌株EHA105,用PCR法对其进行鉴定.结果重组载体pUCm-T-fbpA测序后证实fbpA基因由1 041 bp组成,包括1个1 014 bp的开放阅读框.DNA序列上游由编码一段信号肽的129 bp组成,并对32-kDa蛋白的分泌起决定作用.相应的编码成熟蛋白的序列由885个碱基组成.fbpA基因与来源于BCG1173P2株的同一基因序列完全一致.此外,构建的重组植物表达载体pBI121-fbpA成功转入根癌农杆菌株EHA105.结论编码BCGD2株32-kDa分泌蛋白的fbpA基因分离成功,DNA序列分析证实fbpA基因在分枝杆菌中高度保守,为进一步深入分析fbpA基因以及研制抗结核病转基因植物疫苗奠定了基础.