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摘要:
目的为进一步探索酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)人源B细胞表位,利用甲醇营养型酵母Pichia pastoris表达系统表达TRP-1的B细胞表位区.方法将本实验室已构建好的质粒pUC19/TRP-1进行双酶切,将目的片段亚克隆至带有6His标签的pRSETA载体,将6His融合的TRP-1整体PCR扩增出来,克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上,构建成重组质粒pPIC3.5K/6His-TRP1.该质粒转化酵母菌GS115,经G418筛选得到高拷贝转化子.转化菌体经Mut表型鉴定后,用含0.5%甲醇的培养基诱导表达,表达产物利用Ni-NTA agarose柱通过金属螯合亲和层析进行纯化后,测定其生物学活性.结果通过4天的诱导,该系统成功表达了6His-TRP1蛋白,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为18 kD,纯度可达96%.Western blotting及ELISA实验证实,表达产物具有良好的抗原性和特异性.生物学活性检测证实其具有结合白癜风病人IgG的能力.结论在 Pichia pastoris 表达系统中,获得了具有生物学活性的可溶性重组TRP-1的B细胞表位肽段,为深入研究TRP-1人源表位及白癜风的发病机制、免疫治疗及恶性黑素瘤的免疫治疗奠定了基础.
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文献信息
篇名 TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究
来源期刊 中国皮肤性病学杂志 学科 生物学
关键词 酪氨酸酶相关蛋白-1 B细胞表位 毕赤酵母
年,卷(期) 2004,(5) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 263-266
页数 4页 分类号 Q513+.2
字数 3688字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1001-7089.2004.05.003
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酪氨酸酶相关蛋白-1
B细胞表位
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相关学者/机构
期刊影响力
中国皮肤性病学杂志
月刊
1001-7089
61-1197/R
大16开
陕西省西安市西五路157号
52-17
1987
chi
出版文献量(篇)
9358
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21
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