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TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究
TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究
作者:
刘玉峰
孙东杰
张文红
李廷慧
李春英
李毅
李立文
王立峰
高天文
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
酪氨酸酶相关蛋白-1
B细胞表位
毕赤酵母
摘要:
目的为进一步探索酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)人源B细胞表位,利用甲醇营养型酵母Pichia pastoris表达系统表达TRP-1的B细胞表位区.方法将本实验室已构建好的质粒pUC19/TRP-1进行双酶切,将目的片段亚克隆至带有6His标签的pRSETA载体,将6His融合的TRP-1整体PCR扩增出来,克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上,构建成重组质粒pPIC3.5K/6His-TRP1.该质粒转化酵母菌GS115,经G418筛选得到高拷贝转化子.转化菌体经Mut表型鉴定后,用含0.5%甲醇的培养基诱导表达,表达产物利用Ni-NTA agarose柱通过金属螯合亲和层析进行纯化后,测定其生物学活性.结果通过4天的诱导,该系统成功表达了6His-TRP1蛋白,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为18 kD,纯度可达96%.Western blotting及ELISA实验证实,表达产物具有良好的抗原性和特异性.生物学活性检测证实其具有结合白癜风病人IgG的能力.结论在 Pichia pastoris 表达系统中,获得了具有生物学活性的可溶性重组TRP-1的B细胞表位肽段,为深入研究TRP-1人源表位及白癜风的发病机制、免疫治疗及恶性黑素瘤的免疫治疗奠定了基础.
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内容分析
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文献信息
篇名
TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究
来源期刊
中国皮肤性病学杂志
学科
生物学
关键词
酪氨酸酶相关蛋白-1
B细胞表位
毕赤酵母
年,卷(期)
2004,(5)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
263-266
页数
4页
分类号
Q513+.2
字数
3688字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1001-7089.2004.05.003
五维指标
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
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引文网络
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(6)
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节点文献
酪氨酸酶相关蛋白-1
B细胞表位
毕赤酵母
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国皮肤性病学杂志
主办单位:
西安交通大学
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-7089
CN:
61-1197/R
开本:
大16开
出版地:
陕西省西安市西五路157号
邮发代号:
52-17
创刊时间:
1987
语种:
chi
出版文献量(篇)
9358
总下载数(次)
21
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