TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究

• 作者: 刘玉峰 孙东杰 张文红 李廷慧 李春英 李毅 李立文 王立峰 高天文
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 酪氨酸酶相关蛋白-1 B细胞表位 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 263-266
• 页数: 4页
• 分类号: Q513+.2
• 字数: 3688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7089.2004.05.003

摘要

目的为进一步探索酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)人源B细胞表位,利用甲醇营养型酵母Pichia pastoris表达系统表达TRP-1的B细胞表位区.方法将本实验室已构建好的质粒pUC19/TRP-1进行双酶切,将目的片段亚克隆至带有6His标签的pRSETA载体,将6His融合的TRP-1整体PCR扩增出来,克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上,构建成重组质粒pPIC3.5K/6His-TRP1.该质粒转化酵母菌GS115,经G418筛选得到高拷贝转化子.转化菌体经Mut表型鉴定后,用含0.5%甲醇的培养基诱导表达,表达产物利用Ni-NTA agarose柱通过金属螯合亲和层析进行纯化后,测定其生物学活性.结果通过4天的诱导,该系统成功表达了6His-TRP1蛋白,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为18 kD,纯度可达96%.Western blotting及ELISA实验证实,表达产物具有良好的抗原性和特异性.生物学活性检测证实其具有结合白癜风病人IgG的能力.结论在 Pichia pastoris 表达系统中,获得了具有生物学活性的可溶性重组TRP-1的B细胞表位肽段,为深入研究TRP-1人源表位及白癜风的发病机制、免疫治疗及恶性黑素瘤的免疫治疗奠定了基础.