小鼠AFP-CTLA4融合蛋白真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 易继林 田耕
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 肝癌
• 页码范围: 283-285
• 页数: 3页
• 分类号: R73
• 字数: 3033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.02.008

摘要

目的:克隆小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因并构建小鼠甲胎蛋白-细胞毒性T淋巴细胞抗原4(mAFP-CTLA4)融合蛋白真核表达载体.方法:从Hepal-6细胞中提取总RNA进行RT-PCR,扩增出mAFP基因,亚克隆于pcDNA3.1载体.PCR法从质粒pmCTLA4-Ig中克隆出mCTLA4膜外部分基因并通过重叠PCR法添加接头,重组连接于pmAFP质粒中mAFP基因后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆酶切、测序鉴定.用质粒瞬时转染CHO细胞,Westernblot检测融合蛋白的表达.结果:利用RT-PCR从Hepal-6细胞总RNA中成功克隆出1.8kb的nAFP基因;重组阳性克隆经酶切鉴定证实连有接头的CTLA4膜外部分基因已正确插入pmAFP质粒中,测序结果证实各片段连接方向及阅读框正确.用质粒瞬时转染CHO细胞,Western blot检测到预计大小分子量蛋白的表达.结论:mAFP-CTLA4融合蛋白真核表达载体的构建成功,为进一步研究其在肝癌免疫治疗中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	易继林	华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科	115	637	12.0	17.0
2	田耕	华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科	4	3	1.0	1.0