人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义

• 作者: 于嘉屏 张建 王爱华 顾鹏飞
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 线粒体肌酸激酶 基因表达 胃肠肿瘤
• 年，卷（期）: 2004,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1320-1324
• 页数: 5页
• 分类号: R735.2|R735.3
• 字数: 3583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2004.12.013

摘要

目的:在大肠杆菌中克隆表达人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的蛋白,免疫家兔制备抗uMtCK的多克隆抗体,检测胃肠肿瘤组织中uMtCK的表达.方法:采用RT-PCR从培养的肿瘤细胞(HeLa细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK基因片段,构建重组质粒pQE30-uMtCK,转化大肠杆菌表达酶融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE、Western印迹鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备了抗uMtCK多抗.免疫组化法检测59例胃及直肠肿瘤组织切片中uMtCK的表达.结果:RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠杆菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达.免疫家兔制备的抗uMtCK多抗经Western免疫印迹分析适合作uMtCK的进一步分析.免疫组化检测临床病理标本结果显示,59例胃及直结肠肿瘤标本uMtCK的阳性率为76.5%.结论:成功克隆了人uMtCK的编码基因,并将其在大肠杆菌中成功表达;制备了抗uMtCK多抗,免疫组化检测临床病理标本的结果提示uMtCK有助于胃肠肿瘤的诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王爱华	第二军医大学长征医院实验诊断科	36	145	6.0	10.0
2	于嘉屏	第二军医大学长征医院实验诊断科	14	73	5.0	8.0
3	张建	第二军医大学长征医院实验诊断科	50	318	10.0	14.0
4	顾鹏飞	第二军医大学长征医院实验诊断科	6	34	4.0	5.0