结核分支杆菌MPT64基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达、纯化和诊断运用

• 作者: 何秀云 庄玉辉 张晓刚 熊志红 董恩军
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分支杆菌 MPT64 基因表达 诊断
• 年，卷（期）: 2004,（21）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 48-51
• 页数: 4页
• 分类号: R378.911
• 字数: 2842字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2004.21.013

摘要

目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值.方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳重组蛋白;Western印迹及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白免疫原性,并检测血清的抗结核抗体.结果构建了能表达重组MPT64的大肠杆菌工程菌,表达的重组蛋白蛋白为可溶性形式,表达量占细胞总蛋白的30%,分子量约23kD.经离子交换柱纯化后,重组蛋白纯度达90%以上.Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应.ELISA分析表明该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清.结论该实验获得了能高效表达MPT64蛋白抗原的大肠杆菌工程菌.纯化的该重组蛋白具有特异的免疫原性,有一定的诊断运用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庄玉辉	解放军309医院结核病研究室	17	143	9.0	10.0
2	何秀云	解放军309医院结核病研究室	5	29	3.0	5.0
3	张晓刚	解放军309医院结核病研究室	4	27	3.0	4.0
4	熊志红	解放军309医院结核病研究室	5	38	4.0	5.0
5	董恩军	解放军309医院结核病研究室	3	24	3.0	3.0