葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定

• 作者: 兰丽珍 方芳 蹇锐 邓华聪 郑宏庭
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖激酶基因 逆转录病毒载体
• 年，卷（期）: 2004,（16）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1439-1441
• 页数: 3页
• 分类号: R782|R394-33|R587.102
• 字数: 2390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2004.16.007

摘要

目的构建葡萄糖激酶(glucokinase,GK)基因逆转录病毒表达载体及稳定的产毒细胞系,为将GK基因应用于糖尿病的基因治疗打下基础.方法质粒pCMV4-GKZ1经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体PLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体PLX-GK,采用酶切及测序对重组体进行鉴定.而后脂质体转染PLX-GK至包装细胞PA317,检测培养上清病毒滴度,挑选滴度较高的稳定产毒细胞系并对其行PCR及免疫组化鉴定.结果构建了GK基因逆转录病毒表达载体PLX-GK,经酶切及序列分析证实目的基因插入位点和读码框架正确、无突变;建立了稳定产毒细胞系PA317/GK,其培养上清平均病毒滴度为6.8×105cfu/ml,最高为1.8×106cfu/ml,PCR及免疫组化证实GK基因整合入PA317/GK细胞基因组并有GK的表达.结论成功构建了携GK基因的逆转录病毒表达载体及高滴度的稳定产毒细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰丽珍	重庆医科大学第一附属医院内分泌科	25	106	5.0	9.0
2	邓华聪	重庆医科大学第一附属医院内分泌科	197	1595	19.0	31.0
3	郑宏庭	重庆医科大学第一附属医院内分泌科	20	95	5.0	9.0
4	方芳	重庆医科大学第一附属医院内分泌科	29	155	8.0	12.0
5	蹇锐	重庆医科大学第一附属医院内分泌科	4	4	1.0	1.0