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摘要:
目的以复制缺陷的腺病毒为载体,细菌内同源重组法构建有npcl基因的腺病毒载体.方法利用限制性内切酶kpnl HindⅢ从带有朊病毒启动子的质粒prp-pro-mlpcl中切下目的基因npcl-1,克隆至穿梭质粒PAdtrack-CMV,再与PAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,经抗性筛选和酶切鉴定的质粒再利用脂质体转染人293例细胞中扩增,利用Adeasy-1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒,RT-PCR鉴定目的基因的表达.结果切酶切鉴定,正确的目的基因片断已克隆至穿梭质粒PAdtrack-CMV;卡那霉素进行抗性筛选及Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d后见明显的绿色荧光蛋白表达.回收病毒,可重复感染293细胞,证实有感染能力的病毒颗粒包装成功.结论利用腺病毒载体系统Adeasy-1可构建能成功表达Pac Ⅰ基因的腺病毒载体,为对Niemann pick' s病C型的进一步研究提供了条件.
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文献信息
篇名 利用Adeasy-1系统构建npcl基因非复制型腺病毒载体并鉴定
来源期刊 中国现代医学杂志 学科 医学
关键词 腺病毒载体 PacⅠ基因 基因重组
年,卷(期) 2004,(23) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 14-17,20
页数 5页 分类号 R394.4:R511.8
字数 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1005-8982.2004.23.004
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 卜碧涛 华中科技大学附属同济医院神经内科 84 412 10.0 15.0
2 曹小丽 华中科技大学附属同济医院神经内科 2 2 1.0 1.0
3 张宇红 华中科技大学附属同济医院神经内科 5 15 3.0 3.0
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研究主题发展历程
节点文献
腺病毒载体
PacⅠ基因
基因重组
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国现代医学杂志
半月刊
1005-8982
43-1225/R
大16开
湖南省长沙市湘雅路87号
42-143
1991
chi
出版文献量(篇)
24199
总下载数(次)
6
总被引数(次)
119228
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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