利用Adeasy-1系统构建npcl基因非复制型腺病毒载体并鉴定

• 作者: 卜碧涛 张宇红 曹小丽
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 PacⅠ基因 基因重组
• 年，卷（期）: 2004,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-17,20
• 页数: 5页
• 分类号: R394.4:R511.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2004.23.004

摘要

目的以复制缺陷的腺病毒为载体,细菌内同源重组法构建有npcl基因的腺病毒载体.方法利用限制性内切酶kpnl HindⅢ从带有朊病毒启动子的质粒prp-pro-mlpcl中切下目的基因npcl-1,克隆至穿梭质粒PAdtrack-CMV,再与PAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,经抗性筛选和酶切鉴定的质粒再利用脂质体转染人293例细胞中扩增,利用Adeasy-1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒,RT-PCR鉴定目的基因的表达.结果切酶切鉴定,正确的目的基因片断已克隆至穿梭质粒PAdtrack-CMV;卡那霉素进行抗性筛选及Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d后见明显的绿色荧光蛋白表达.回收病毒,可重复感染293细胞,证实有感染能力的病毒颗粒包装成功.结论利用腺病毒载体系统Adeasy-1可构建能成功表达Pac Ⅰ基因的腺病毒载体,为对Niemann pick' s病C型的进一步研究提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卜碧涛	华中科技大学附属同济医院神经内科	84	412	10.0	15.0
2	曹小丽	华中科技大学附属同济医院神经内科	2	2	1.0	1.0
3	张宇红	华中科技大学附属同济医院神经内科	5	15	3.0	3.0