小鼠白介素18与白介素1β转化酶共表达载体的构建及真核表达

• 作者: 吴克复 宋玉华 徐玢 林永敏 石洋 董成亚 马小彤
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠白细胞介素18 真核表达载体pIRES L1210白血病细胞 肿瘤疫苗
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 177-181
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2005.03.001

摘要

为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,筛选稳定表达细胞株.转染细胞RT-PCR及转染细胞培养上清IL-18 ELISA检测结果表明,肿瘤细胞可以表达并分泌成熟的IL-18.培养上清的IL-18可显著诱导ConA刺激的小鼠脾细胞产生IFN-γ,表明其具有功能活性.生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比,转染空载体pIRES、pIRES-proIL-18、pIRES-ICE、pIRES-proIL-18-ICE基因对肿瘤细胞生长增殖无明显影响.IL-18白血病瘤苗的成功制备表明,利用pIRES载体在同一肿瘤细胞中共表达的proIL-18和ICE能够完全模拟生理过程,在真核细胞内有效酶切,分泌出成熟并有功能活性的IL-18;构建的IL-18瘤苗为进一步评价其在小鼠体内的抗白血病效果奠定基础.