DcR3反义RNA表达载体的构建及表达

• 作者: 吴泰璜 段伟宏 苏忠学
• 来源期刊: 中国现代普通外科进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因 DcR3·RNA 反义·基因转移 水平·基因表达·癌 肝细胞
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 17-19
• 页数: 3页
• 分类号: Q782|Q786
• 字数: 2856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9905.2005.01.008

摘要

目的:构建DcR3反义RNA表达载体PVAXⅠ-as-DcR3,并研究其对肝癌细胞中DcR3蛋白表达的影响.方法:从肝癌组织中提取总RNA,RT-PCR法克隆出DcR3基因片段,将其与PMD18-T载体连接,经BamHⅠ、XholⅠ双酶切TA-DcR3及PVAXⅠ(-)真核表达载体后,使用T4DNA连接酶连接,构建反义DcR3表达载体.转染肝癌细胞株SMMC7721.Western blot 法检测DcR3蛋白表达.结果:用RT-PCR方法从肝癌组织中扩增出DcR3片段,并经测序证实.重组质粒经酶切鉴定正确,转染肝癌细胞株SMMC7721后,经Western blot 证实DcR3蛋白表达较对照组下降.结论:成功构建反义RNA表达载体PVAXⅠ-as-DcR3,构建的反义表达载体PVAXⅠ-as-DcR3具有阻断DcR3基因表达的效应.