基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体的构建及鉴定

• 作者: 李娟 熊刚 王凯 蒋耀光 许雪青 郭洪 陈雪丹
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: DcR3 RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1477-1479,Ⅱ
• 页数: 4页
• 分类号: Q753
• 字数: 3446字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2009.12.032

摘要

目的 构建基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体.方法 人工设计针对DcR3编码区的干扰序列,使其转录后RNA结构类似于miR30结构,茎杆序列替换成DcR3 序列,送上海生物工程技术服务有限公司合成.以该序列为模板,分别利用携带EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物行PCR扩增,通过酶切连接的方式将插入片段连入p201慢病毒载体骨架中.经酶切和测序鉴定后,用包装质粒pMD2G及包膜质粒psAX2共同转染293FT细胞进行病毒包装.病毒包装上清液加入培养的人食管鳞癌细胞系KYSE150细胞中,用FACS分选后进行RT-PCR和Western blot检测DcR3表达情况.结果 构建了针对DcR3 的3条慢病毒干扰载体,成功包装出病毒,并不同程度地抑制了DcR3蛋白的表达.结论 基于miR-30的DcR3能有效抑制DcR3表达,为进一步研究DcR3 功能打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋耀光	第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心	243	1835	20.0	31.0
2	熊刚	第三军医大学西南医院胸心外科	47	300	10.0	14.0
3	许雪青	第三军医大学基础医学部医学遗传教研室	31	132	6.0	10.0
4	郭洪	第三军医大学基础医学部医学遗传教研室	19	52	4.0	6.0
5	李娟	第三军医大学基础医学部医学遗传教研室	10	33	4.0	5.0
6	王凯	第三军医大学基础医学部医学遗传教研室	9	56	4.0	7.0
7	陈雪丹	第三军医大学基础医学部医学遗传教研室	7	36	3.0	6.0