一种简单快速的cDNA文库构建方法

• 作者: 刘睿 叶波平 吴梧桐 王旻 王颖 胡亚楠 赵艳景
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: cDNA文库 长距离PCR 文库构建
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 268-271
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3355字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2005.03.018

摘要

目的:建立一种以LD-PCR(long-distance-PCR)为基础的cDNA文库的快速构建方法.方法:以鲨鱼再生肝组织为材料获得总RNA,用偶联有Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含BamH Ⅰ酶切位点的Oligo(dT)16引物在逆转录酶M-MLV的作用下合成cDNA第一链,进而利用末端转移酶在合成的cDNA第一链的3′末端引入poly-dC尾;以含BamH Ⅰ酶切位点的Oligo(dT)16和含Hind Ⅲ酶切位点的Oligo(dG)10为引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,通过T4 DNA连接酶连接到经相同双酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库,对文库的容量、重组率以及多样性进行分析.结果:通过本方法构建的cDNA文库容量约为5.84×105个/μg ds-cDNA,重组率为96.7%;对随机提取的30个克隆质粒的插入序列进行分析,共获得25个不同的cDNA序列,且未见重复序列.结论:本法构建的cDNA质粒文库具有快速、简单的特点,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王颖	中国药科大学生命科学与技术学院	41	506	12.0	22.0
2	吴梧桐	中国药科大学生命科学与技术学院	256	2771	24.0	37.0
3	叶波平	中国药科大学生命科学与技术学院	105	1007	17.0	27.0
4	王旻	中国药科大学生命科学与技术学院	170	1536	20.0	32.0
5	刘睿	中国药科大学生命科学与技术学院	13	131	8.0	11.0
6	赵艳景	中国药科大学生命科学与技术学院	5	40	4.0	5.0
7	胡亚楠	中国药科大学生命科学与技术学院	4	52	4.0	4.0