结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6-CFP10的融合表达及纯化

• 作者: 刘加彬 周艳秋 娄培安 朱荫昌 李玲 王晓婷 章辉 赵广法
• 来源期刊: 热带病与寄生虫学
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 抗原 重组 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 196-200,195
• 页数: 6页
• 分类号: R59|R1
• 字数: 4766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2302.2005.04.002

摘要

目的在原核表达系统融合表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6和培养滤液蛋白CFP10的融合蛋白(rE6C)并纯化,测定抗原性和特异性.方法用将一个柔性的氨基酸"接头"插入原核表达载体pET32c(+)中,构建pET32c(+)-linker.PCR法扩增ESAT-6、CFP10基因.将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,CFP10克隆入linker后,构建E6C融合基因,转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠杆菌BL21中表达,纯化rE6C蛋白,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其抗原性和特异性.结果重组质粒pET32c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致.携带重组质粒的菌株经诱导产生高水平的表达产物,纯化的表达产物具备较高的纯度、抗原性和特异性.结论pET32c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达,rE6C融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,有望用于结核分枝杆菌感染的临床诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱荫昌		84	1216	21.0	30.0
2	章辉		4	7	1.0	2.0
3	王晓婷		6	11	2.0	3.0
4	李玲		1	1	1.0	1.0