Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究

• 作者: 易勇 曾明 朱永红 毛旭虎 王庆旭 程建平 童文德 邹全明 马颖
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 志贺毒素Ⅱ结合亚单位(Stx2B) 紧密黏附素C-端免疫保护性片段(IntiminC300) 疫苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 227-233
• 页数: 7页
• 分类号: R3
• 字数: 6333字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.03.018

摘要

目的构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位(Stx2B)与紧密黏附素C-端免疫保护性片段(IntiminC300)的融合蛋白(Stx2B-IntiminC300),并观察其免疫保护作用. 方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b,T-A克隆后在前期已构建原核表达质粒pET-28a(+)-eaeC300的基础上构建融合基因表达质粒pET-28a(+)-stx2b-eaeC300,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化,获得目的蛋白Stx2B-IntiminC300,以Al(OH)3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,再以EHEC O157:H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠,观察攻毒保护效果. 结果 PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增出了约290 bp的目的片段;原核表达质粒pET-28a(+)-stx2b-eaeC300经酶切及测序鉴定与设计序列一致.转化E.coli BL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约25%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约43×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达.纯化后目的蛋白Stx2B-IntiminC300的纯度达75%,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高,能够抵御致死剂量EHEC O157:H7超声破菌液的毒素攻击. 结论 EHEC O157:H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位(Stx2B)与紧密黏附素C-端免疫保护性片段(IntiminC300)的融合蛋白(Stx2B-IntiminC300)经基因克隆获得了较高的表达率,初步纯化的融合蛋白Stx2B-IntiminC300显示了较好的免疫保护效果.为进一步的EHEC O157:H7疫苗研究奠定了基础.