Stx1B基因克隆、表达及重组蛋白的纯化

• 作者: 单云峰 史智扬 唐震 崔仑标 曾晓燕 汪华 焦永军 葛以跃 马明
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 志贺样毒素 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 23-25
• 页数: 3页
• 分类号: R378.2
• 字数: 2515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.01.006

摘要

目的 构建志贺样毒素1B亚单位(Stx1B)的原核表达载体,获取高纯度的Stx1B重组蛋白.方法 用PCR法扩增Stx1B,通过基因重组技术克隆入原核表达载体pGEX4T-2,将该重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白.进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot检测.结果 重组质粒经诱导后表达分子量为34 kD的重组蛋白,Western blot检测显示特异性条带,亲和层析柱纯化后得到重组蛋白的纯度在90%左右.结论 成功构建了Stx1B重组质粒,表达并纯化出高纯度重组蛋白,为进一步的生物性质研究奠定了基础.