人血栓调节蛋白基因编码片段的克隆及在真核细胞中的表达

• 作者: 乔正荣 张雪梅 戴毅 时德 邹琳 陈开
• 来源期刊: 中国普外基础与临床杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 血栓调节蛋白 真核细胞 重组质粒
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基础与实验研究
• 页码范围: 577-580
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9424.2005.06.018

摘要

目的构建人血栓调节蛋白(hTM)基因真核表达质粒,并导入两种真核细胞[非洲绿猴肾母细胞(COS-7细胞)和脐静脉内皮细胞(HUVECs)]中表达,为临床血栓病的基因治疗提供实验依据和物质基础.方法采用PCR法扩增hTM基因的表达片段,HindⅢ+EcoRⅠ酶切后与pcDNA3.1(+)/neo质粒连接成pcDNA3.1/hTM.经鉴定确认后,由阳离子脂质体包裹转染COS-7细胞及HUVECs,RT-PCR和免疫组化法分别检测转染后细胞hTM的mRNA及蛋白的表达.结果双酶切及测序鉴定均证实hTM基因表达片段被成功克隆,pcDNA3.1/hTM经脂质体介导能有效地转染COS-7细胞和HUVECVs.结论成功构建pcDNA3.1/hTM重组质粒,并且能在两种真核细胞中高效表达,为进一步的基因治疗和对TM抗凝机理研究提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	时德	重庆医科大学附属第一医院血管外科	216	1626	18.0	27.0
2	张雪梅	重庆医科大学医学检验系	75	270	9.0	13.0
3	乔正荣	重庆医科大学附属第一医院血管外科	34	189	8.0	11.0
4	陈开	川北医学院附属医院普外科	62	274	9.0	13.0
5	戴毅	川北医学院附属医院普外科	32	182	9.0	11.0
6	邹琳	重庆医科大学医学检验系	44	193	6.0	12.0