人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定

• 作者: 孔宁 宿晓云 张英 杨莉莉 焦平 王建秋 罗琳 耿学军 范伟全 贺巾超 颜炜群 马杰 魏传宇
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人热休克蛋白70(rhHSP70) 基因表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 516-518
• 页数: 3页
• 分类号: Q78|Q815
• 字数: 3097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2005.05.015

摘要

目的在毕赤酵母(pichia pastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70).方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70.经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆, Western blot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌.结果经PCR法克隆的hHSP70 DNA序列与Gene Bank登录的cDNA序列一致.将hHSP70 DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆.SDS-PAGE和Western blot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72 kD.氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致.rhHSP70表达量高达250mg·L-1.结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌.