风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析

• 作者: 任桂杰 宋绍霞 宋艳艳 温红玲 王志玉 王桂亭 许洪芝 陶泽新
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 风疹病毒 糖蛋白类 毕赤酵母 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 190-193
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.03.007

摘要

目的在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒(rubella virus, RV) JR23株包膜糖蛋白E1,为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定基础. 方法 E1基因的表达质粒pGAPZαA-E1经AvrⅡ线性化后用LiCl法转化酵母菌,在YPD(含100 μg/ml ZeocinTM)平板上两次筛选,挑出单菌落,于液体YPD中培养,并在不同时间收集培养物,用SDS-PAGE和Western blot进行分析. 结果 SDS-PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达,在48 h时表达量达到最高,之后趋于稳定,上清和细胞中均有蛋白表达.Western blot结果表明,上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应,而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应,不能与单克隆抗体反应.这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞,并经过折叠形成了正确的构像,能够与单克隆抗体结合;而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去,没有形成能够被单抗识别的构像,不能与单抗结合. 结论 E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达,且免疫反应性良好.