pcDNA3.1/NT-GFP小凹蛋白1及突变体表达载体的构建及功能分析

• 作者: 何淑雅 廖端芳 徐阳炎 杨慧龄 涂剑
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 分子生物学 小凹蛋白1 突变体 克隆 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 297-300
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 字数: 3354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2005.03.012

摘要

目的 构建pcDNA3.1/NT-GFP小凹蛋白1及对突变体表达载体及表达蛋白生物活性进行分析.方法 采用硫化修饰引物与Pfu酶结合的高度保真性聚合酶链反应体系,自行设计多对引物,分别扩增带His标签的小凹蛋白1全长目的片段、小凹蛋白1(缺失81～101位氨基酸)突变体1片段及小凹蛋白1(缺失143～156位氨基酸)突变体2片段;分别亚克隆入pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO真核表达载体,转化TOP10 E.coli大肠杆菌,在含氨苄的固体LB培养基上随机挑取6个克隆,分别提取质粒后,用PCR法筛选含正确插入阅读框的阳性克隆子并测序鉴定.用脂质体介导法瞬时转染入HepG2细胞,用MTT法、Western blot法初步鉴定GFP-His小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白的生物学活性.结果 筛选得到正确pcDNA3.1/NT-GFP-His小凹蛋白1及突变体表达载体,测序结果无碱基突变及阅读框移码,GFP-His小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白具有天然表达蛋白相似的生物学活性.结论 成功构建具有生物学活性的pcDNA3.1/NT-GFP小凹蛋白1及突变体表达载体,为小凹蛋白1的功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧龄	南华大学药物药理研究所	15	91	6.0	9.0
3	何淑雅	南华大学药物药理研究所	94	346	9.0	14.0
4	徐阳炎	南华大学药物药理研究所	8	42	4.0	6.0
5	廖端芳	南华大学药物药理研究所	190	1734	19.0	31.0
9	涂剑	南华大学药物药理研究所	41	102	5.0	8.0