共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建

• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤细胞 共刺激分子 B7-H1基因 真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: Q786|R730.1
• 字数: 2396字
• 语种: 中文

摘要

以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板, 通过RT-PCR技术, 扩增出B7-H1基因. 按常规方法克隆进pEF6V5His A载体, 重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞, 48 h后进行间接免疫荧光试验, 72 h后用Blasticidin进行筛选, 挑选出能稳定表达B7-H1的细胞株. 结果表明: 成功地克隆小鼠B7-H1基因并构建了用于表达B7-H1基因的真核表达载体, 经间接免疫荧光试验证明, 该基因在CHO细胞中得到表达. 经Western-blotting检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-H1基因.