抗菌肽Adenoregulin基因工程菌培养条件的优化及分批发酵研究

• 作者: 周宇荀 曹巍 王锦之 罗清平 魏东芝
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 工学
• 关键词: adenoregulin 大肠杆菌 重组表达 优化 高密度
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 发酵工程
• 页码范围: 615-621
• 页数: 7页
• 分类号: TQ920.6
• 字数: 5311字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.020

摘要

Adenoregulin(ADR)是来源于南美树蛙Phyllomedusa bicolor皮肤的含有33个氨基酸的抗菌肽,在非极性环境中形成α-螺旋型结构,具有抗菌活性强、抗菌谱广的特点.将ADR基因克隆于pET32a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),对这一工程菌株的培养条件进行了优化.通过正交试验,考察诱导时机、诱导剂量和诱导时间三个因素的不同水平对蛋白表达的影响,结果发现诱导时机的影响尤为显著,考察了9种不同培养基对表达量的影响,发现培养基中加入葡萄糖对目标蛋白的稳定表达起了重要的作用,确定最佳培养条件为:培养基为2×YT+0.5%葡萄糖,诱导时机为OD600=0.9左右,诱导剂IPTG加入的终浓度为0.1mmol/L,诱导时间为4h.采用前期恒pH、后期指数流加的策略进行工程菌BL21(DE3)/pET32a-adr的高密度培养,在整个流加过程中,通过控制葡萄糖的加入量,将菌株的比生长速率控制在0.15h-1,乙酸浓度也被控制在较低的水平(＜2g/L),但是质粒丢失严重,在发酵结束时,约有40%的大肠杆菌中不带质粒,这导致了目标蛋白的表达量下降严重,但是表达的目标蛋白90%以上为可溶性形式.表达的融合蛋白无抑菌活性,而裂解后得到的ADR单体具有明显的抑菌活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏东芝	华东理工大学生物反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所	158	1415	22.0	29.0
2	周宇荀	华东理工大学生物反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所	6	49	4.0	6.0
3	曹巍	华东理工大学生物反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所	1	24	1.0	1.0
4	罗清平	华东理工大学生物反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所	2	25	1.0	2.0
5	王锦之	华东理工大学生物反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所	3	26	1.0	3.0