血管基膜衍生多功能肽基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定

• 作者: 周建国 张曼 彭淑平 戴文建 曹建国 董林
• 来源期刊: 湖南师范大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤 血管基膜衍生多功能肽 毕赤酵母GS115 pPIC9K 血管形成抑制剂
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: R4
• 字数: 4838字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-016X.2005.01.005

摘要

目的:利用PCR技术从含有目的基因的质粒pGEX-4T-1-VBMDMP获得带有SnabⅠ和NotⅠ酶切位点并融合有GST的目的基因片段并测序鉴定,将PCR产物纯化、酶切、回收,克隆到pPIC9K载体,转化入大肠杆菌DH5a扩增,用琼脂糖凝胶电泳,限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定.方法:Bgl Ⅱ线性新构建的表达载体pPIC9K-GST-VBMDMP,然后用原生质体转化法转化毕赤酵母细胞,并用pPIC9K空质粒也转入酵母细胞进行对照.用煮-冻-煮法裂解已转化有目的基因的毕赤酵母细胞提取DNA并行PCR鉴定,获得阳性重组子,行多克隆筛选和表型鉴定.筛选His+Muts表型的转化子,在MGY液体培养基中30℃摇床培养,每24 h从培养基中转移1 ml培养基上清于-70℃保存,并保持培养瓶中培养基的量和培养基中甲醇0.5%的浓度不变,8 d后行SDS-PAGE检测表达的蛋白,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化获得GST-VBMDMP融合蛋白;用凝血酶切割GST-VBMDMP并分离获得VBM-DMP.结果:发现VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成;同时(VBMDMP 10 mg/kg,6 mg/kg,2 mg/kg)对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有显著抑制作用(瘤重抑制率分别为96.6%,82.1%,61.2%).VBMDMP(GST-VBMDMP 10 mg/kg,6 mg/kg,2 mg/kg)对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有显著抑制作用(自发性肺转移瘤结节抑制率分别为96.8%,87.9%,75.3%).结论:VBMDMP能够抑制鼠主动脉内皮细胞管状结构的形成,并对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有明显的抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭淑平	中南大学肿瘤研究所	11	60	4.0	7.0
2	周建国	南华大学肿瘤研究所	56	367	11.0	16.0
3	曹建国	南华大学肿瘤研究所	90	851	17.0	23.0
4	戴文建	南华大学肿瘤研究所	2	18	1.0	2.0
5	董林	南华大学肿瘤研究所	1	0	0.0	0.0