口蹄疫病毒3D 蛋白在体外的表达纯化及二级结构分析

• 作者: 刘健 刘湘涛 尚佑军 尹双辉 林祥梅 梅林 韩雪清
• 来源期刊: 微生物学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 3D蛋白 表达纯化 CD分析
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-7021.2005.05.002

摘要

口蹄疫(FMD)是严重影响全球农业经济的高度传染的毁灭性的疫病.3D蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)编码的RNA聚合酶,参与病毒RNA的复制.利用PCR扩增得到了FMDV的3D基因片段,然后将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pETFM3D.转化宿主菌BL21(DE3)后,利用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Western boltting分析结果表明,得到了稳定、过量表达的可溶性的3D蛋白质.目的蛋白质经NI亲和层析柱一步纯化就达到95%,再经Q-sepharose柱纯化后达到97%.通过圆二(CD)色谱测定和计算3D蛋白质在不同的pH(2、4、6、8和10)和不同的温度下(25～85℃)的二级结构.上述结果表明,表达的可溶性3D蛋白质具有高表达、易纯化和稳定性好等特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩雪清		69	332	8.0	16.0
2	林祥梅		135	890	13.0	26.0
3	刘湘涛	中国农业科学院兰州兽医研究所	86	606	14.0	22.0
4	尚佑军	中国农业科学院兰州兽医研究所	37	117	6.0	10.0
5	尹双辉	中国农业科学院兰州兽医研究所	12	113	3.0	10.0
6	刘健		2	8	1.0	2.0
7	梅林		2	260	2.0	2.0