亮白曲霉乳糖酶基因在毕赤酵母中的高效分泌表达及酶学性质研究

• 作者: 姚斌 张伟 范云六
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 乳糖酶 毕赤酵母 高效表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 247-252
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|Q55
• 字数: 5655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.02.019

摘要

将克隆的亮白曲霉(Aspergillus candidus)乳糖酶基因lacb'插入到毕赤酵母(Pichia pastoris)高效表达载体pPIC9中,与分泌信号肽序列α-因子融合,通过同源重组将lacb'整合到酵母染色体上.通过SDS-PAGE检测和表达产物的酶活性筛选,得到重组转化子,证明乳糖酶获得有效分泌和高效表达.表达的乳糖酶为糖蛋白,表观分子量为130kD,脱糖基后的蛋白分子量下降为110kD.经过5L小罐高密度发酵,重组酵母中酶蛋白表达量为6mg/mL发酵液,每毫升发酵液中乳糖酶的活力为3600U,高于目前国内外报道的水平.进一步研究了表达产物的酶学性质,该酶最适pH为5.2,最适反应温度60℃,比活性为706.5±2.6U/mg,Km为1.7mmol/L,Vmax为3.3μmol/min.与米曲霉ATCC 20423的乳糖酶相比,该乳糖酶具热稳定性强、比活性高、pH范围宽等特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚斌	中国农业科学院饲料研究所	111	2079	24.0	42.0
2	范云六	中国农业科学院生物技术研究所	74	2436	27.0	48.0
3	张伟	中国农业科学院生物技术研究所	77	419	13.0	18.0