抗克伦特罗单链抗体噬菌体展示文库的构建初步筛选及鉴定

• 作者: 孙远明 杨金易 潘科 王弘 雷红涛
• 来源期刊: 农产品加工·学刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 克伦特罗 单链抗体 噬菌体 展示文库
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 页码范围: 124-127
• 页数: 4页
• 分类号: Q2
• 字数: 3707字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-9646-B.2005.09.031

摘要

构建抗克伦特罗(CBL)单链抗体噬菌体展示文库(scFv phage displaylibraries),从中筛选CBL特异性噬菌体单链抗体(phage scFv).提取经CBL免疫的小鼠的脾脏总RNA,RT-PCR扩增全套抗体轻链可变区(VL)及重链可变区(VH)基因,重叠延伸法将VL、VH片段拼接为单链抗体(scFv)基因片段.将scFv克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化感受态大肠杆菌TG1,用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,构建噬菌体单链抗体库.对抗体库进行亲合富集后,ELISA法筛选阳性克隆.扩增出抗CBL的VL、VH基因片段并拼接为全长的scFv,抗体库库容约为1.6×104,经4轮"吸附-洗脱-扩增"的富集,ELISA筛选到6个具有CBL结合活性的phage-scFv.成功构建抗CBL单链抗体噬菌体展示库,并初步筛选到具有CBL结合活性的噬菌体scFv,特异性好,为进一步大量表达CBL单链抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王弘		1	3	1.0	1.0
2	潘科		1	3	1.0	1.0
3	雷红涛		1	3	1.0	1.0
4	杨金易		1	3	1.0	1.0
5	孙远明		1	3	1.0	1.0