大肠杆菌O157VT2 B亚基基因的克隆与表达

• 作者: 刘建青 周志江 郑峰
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌O157 志贺毒素2 B亚基 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 115-118
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2
• 字数: 2540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.02.006

摘要

目的对大肠杆菌O157VT2 毒素 B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2 毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础.方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,连接到表达载体pET-28a以构建重组质粒.将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,通过IPTG诱导进行表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳分析和Western检测. 结果用PCR方法扩增出了预期大小的VT2 B亚基基因,克隆得到重组质粒pET28a-VT2B,转化后宿主菌成功表达分子量为8kD的目的蛋白,用特异抗体经Western检测该条带为阳性反应.结论目的基因成功克隆到宿主菌内,目的蛋白得到高效表达,最佳诱导时间为4 h,目的蛋白表达量可达总蛋白量45.72%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周志江	天津大学农业与生物工程学院	59	584	12.0	20.0
2	郑峰	军需大学军需工程系	1	3	1.0	1.0
3	刘建青	军需大学军需工程系	2	3	1.0	1.0