人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定

• 作者: 姜勇 曹永宽 李红乐 田伏洲 秦清和 莫永炎 邓鹏 邢飞跃
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AWP1 红色荧光蛋白 重组腺病毒 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 434-438
• 页数: 5页
• 分类号: R996
• 字数: 4486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2005.05.002

摘要

目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具. 方法将克隆的AWP1 cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中;经酶切鉴定正确后Pme Ⅰ线形化,与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组;用lipofectAMINE将Pac Ⅰ线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒;通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒.结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWP1cDNA序列正确,感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达.结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒.