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摘要:
目的:建立外标准法SYBR GREEN I实时定量(real-time)RT-PCR方法,以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB/c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达的影响.方法:取正常BALB/c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,得到333 bp扩增产物.经回收纯化后作为real-timePCR的标准品,稀释为106、105、104、103、102、101拷贝,制作标准曲线;并同时进行普通PCR,比较其灵敏度.优化反应条件使溶解曲线有特异扩增.检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达.结果:建立的外标准法SYBR GREEN I实时定量RT-PCR方法可以灵敏的检测到10 copy的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰,溶解温度为82.9℃.没有明显的引物二聚体和非特异峰出现.不同标准点批间变异系数范围为5.8%~14.3%(n=6).与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高(P<0.05).结论:外标准法SYBR GREEN I实时定量RT-PCR具有灵敏度高,特异性强,重复性好的特点,比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平.
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文献信息
篇名 实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达
来源期刊 天津医科大学学报 学科 生物学
关键词 外标准法实时定量RT-PCR TSHR mRNA SYBR GREEN I
年,卷(期) 2005,(4) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 509-511,514
页数 4页 分类号 Q45|Q786
字数 2105字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1006-8147.2005.04.001
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 沈炳玲 天津医科大学病理教研室 21 100 6.0 9.0
2 朱云娟 天津医科大学寄生虫学教研室 23 32 3.0 4.0
3 黄丽娟 天津医科大学病理教研室 6 7 2.0 2.0
4 陆凤先 天津医科大学病理教研室 15 48 4.0 6.0
5 陈宁 天津医科大学病理教研室 24 92 5.0 9.0
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研究主题发展历程
节点文献
外标准法实时定量RT-PCR
TSHR mRNA
SYBR GREEN I
研究起点
研究来源
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
天津医科大学学报
双月刊
1006-8147
12-1259/R
16开
天津市和平区气象台路22号
1995
chi
出版文献量(篇)
4282
总下载数(次)
6
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