实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达

• 作者: 朱云娟 沈炳玲 陆凤先 陈宁 黄丽娟
• 来源期刊: 天津医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 外标准法实时定量RT-PCR TSHR mRNA SYBR GREEN I
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 509-511,514
• 页数: 4页
• 分类号: Q45|Q786
• 字数: 2105字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8147.2005.04.001

摘要

目的:建立外标准法SYBR GREEN I实时定量(real-time)RT-PCR方法,以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB/c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达的影响.方法:取正常BALB/c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA,逆转录后进行PCR,得到333 bp扩增产物.经回收纯化后作为real-timePCR的标准品,稀释为106、105、104、103、102、101拷贝,制作标准曲线;并同时进行普通PCR,比较其灵敏度.优化反应条件使溶解曲线有特异扩增.检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达.结果:建立的外标准法SYBR GREEN I实时定量RT-PCR方法可以灵敏的检测到10 copy的核酸,灵敏度为普通PCR的104倍;溶解曲线只有特异峰,溶解温度为82.9℃.没有明显的引物二聚体和非特异峰出现.不同标准点批间变异系数范围为5.8%～14.3%(n=6).与对照组比较,TSHR大分子免疫的BALB/c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高(P＜0.05).结论:外标准法SYBR GREEN I实时定量RT-PCR具有灵敏度高,特异性强,重复性好的特点,比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈炳玲	天津医科大学病理教研室	21	100	6.0	9.0
2	朱云娟	天津医科大学寄生虫学教研室	23	32	3.0	4.0
3	黄丽娟	天津医科大学病理教研室	6	7	2.0	2.0
4	陆凤先	天津医科大学病理教研室	15	48	4.0	6.0
5	陈宁	天津医科大学病理教研室	24	92	5.0	9.0