丙型肝炎病毒ns3区全长基因在大肠杆菌中的高效表达及纯化

• 作者: 吕欣 尹文 徐志凯 杨敬 薛小平 雷迎峰
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 非结构区3蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-15
• 页数: 3页
• 分类号: Q785|R373.2+1
• 字数: 2673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2005.01.004

摘要

利用PCR技术扩增HCV ns3基因,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为一抗行Western-Blot证实特异性和抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性.HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐志凯	第四军医大学微生物学教研室	216	1097	15.0	22.0
2	尹文	第四军医大学微生物学教研室	264	1718	18.0	25.0
3	吕欣	第四军医大学微生物学教研室	48	174	7.0	10.0
4	雷迎峰	第四军医大学微生物学教研室	60	194	7.0	10.0
5	杨敬	第四军医大学微生物学教研室	35	91	5.0	7.0
6	薛小平	第四军医大学微生物学教研室	27	202	8.0	13.0