重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建

• 作者: 党耕町 杨民 郭均 马庆军
• 来源期刊: 中国骨与关节损伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白7 腺相关病毒 基因克隆
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 458-461
• 页数: 4页
• 分类号: R6
• 字数: 3573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9935.2005.07.010

摘要

目的构建重组人骨形态发生蛋白7(hBMP7)的腺相关病毒(AAV)载体.方法通过RT-PCR方法,从HEK293细胞中扩增hBMP7全长cDNA并亚克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV.将pSNAV-hBMP7质粒DNA转染BHK-21细胞,筛选出携带hBMP7的AAV载体细胞株-BHK-21细胞.用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2按MOI=0.1感染BHK-21载体细胞株后收获病毒液,通过氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提纯化病毒.结果所克隆的hBMP7全长cDNA经测序证实和已知hBMP7序列完全一致.通过用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2感染携带hBMP7基因的AAV载体细胞株BHK-21细胞的方法获得了滴度为2×1012vg/ml、纯度达99%的重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体(AAV-hBMP7).结论RT-PCR方法从HEK293细胞中扩增克隆hBMP全长cDNA是一种有效可行的方法.成功地构建了高滴度、高纯度的AAV-hBMP7载体,为进一步体内及体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	党耕町	北京大学第三医院骨科	187	3697	31.0	51.0
2	马庆军	北京大学第三医院骨科	75	1088	15.0	29.0
3	杨民	北京大学第三医院骨科	10	152	5.0	10.0
4	郭均	北京大学第三医院骨科	2	4	2.0	2.0