可回复性永生化逆转录病毒载体pLNCTIGlox的构建与表达

• 作者: 李俊刚 王宇明 陈耀凯
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 可回复性永生化 肝细胞 pLNCTIGlox
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 975-978
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4249字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2005.08.010

摘要

目的:为建立可回复性永生化肝细胞株,构建带有筛选基因NeoR、报道基因EGFP及重组位点loxP的可回复性永生化逆转录病毒载体.方法:将2.1kb SV40T亚克隆到pIRES2-EGFP的相应位点,再酶切下3.4kb SV40T-IRES-EGFP片段插入逆转录病毒载体pLNCX2的两个相同酶切位点之间,构成新载体pLNCTIG.最后,将线性化pLNCTIG和loxP双链片段混合连接.取连接产物转化高效感受态DH5α细胞.菌落PCR和酶切法鉴定阳性克隆.转染包装细胞PT67并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.扩大培养稳定转染的细胞,免疫组化染色检测SV40T基因的表达.结果:随机挑取19个克隆,3个电泳分离出约1.1kb阳性条带.取上述阳性克隆进行酶切鉴定,结果仅出现一条约9.5kb的条带,证明该克隆为阳性重组体.转染PT67细胞24 h后,荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光.免疫组化染色显示细胞胞核呈阳性染色.结论:成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体pLNCTIGlox.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宇明	中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所	55	380	11.0	14.0
2	李俊刚	中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所	5	19	3.0	4.0
3	陈耀凯	中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所	10	39	4.0	5.0