单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定

• 作者: 余多慰 姜永强 郑玉玲 郝淮杰 马茹
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 单链二硫键稳定抗体 产量 超抗原 SEA(D227A) 稳定性
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 269-272
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3553字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2005.03.002

摘要

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFvSEA(D227A).方法:构建scdsFv-SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达.包涵体经洗涤和复性后,用Q Sepharose HP和Hiprep26/60Sephacryl S-200HR纯化.纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性.结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.通过复性及Q Sepharose HP离子交换柱和Hiprep 26/60Sephacryl S-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg.活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高.结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马茹	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	10	34	3.0	5.0
2	郑玉玲	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	33	110	6.0	9.0
3	余多慰	南京师范大学生命科学学院分子生物学实验室	42	239	9.0	12.0
4	郝淮杰	南京师范大学生命科学学院分子生物学实验室	1	2	1.0	1.0