大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化

• 作者: 方宏清 李彦英 王德解 陈宏 陈惠鹏
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 羧肽酶B 毕赤酵母 醇氧化酶启动子 发酵培养
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 244-247
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3548字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2005.03.012

摘要

目的:利用毕赤酵母表达系统,表达大鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidase B,proCPB)蛋白,同时探讨最优表达条件,为规模化发酵生产羧肽酶B奠定基础.方法:以RT-PCR法从SD大鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,转入毕赤酵母Gs115细胞,在甲醇的诱导下表达目的蛋白.结果与结论:首次实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达;通过表达条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%(体积比体积)的酪蛋白水解物和3 mmol/L的PMSF,于28℃,每隔12 h补加0.5%(体积比体积)的甲醇,重组酵母Gs115-proCPB表达的重组蛋白可达500 mg/L,表达的目的蛋白占总蛋白的94%,活化后的重组CPB相对分子质量为35.1×10 3,与理论值(35.2×10 3)极相近.活性测定表明,重组proCPB活化后的CPB的比活力可达110 U/mg(CPB参照品为180 U/mg).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宏	西北农林科技大学动物科技学院	225	1718	19.0	31.0
3	方宏清	军事医学科学院生物工程研究所	42	245	8.0	13.0
4	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
7	李彦英	军事医学科学院生物工程研究所	11	39	4.0	6.0
8	王德解	西北农林科技大学动物科技学院	2	16	2.0	2.0