利用基因敲除技术缺失毕赤酵母羧肽酶Y基因的初步研究

• 作者: 刘春杰 吴祖泽 王文文 郝木强 靳继德
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母 羧肽酶 基因敲除
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 673-677,697
• 分类号: Q78
• 字数: 4009字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.09.007

摘要

目的 通过基因敲除技术缺失毕赤酵母编码的羧肽酶Y(carboxypeptidase Y,CPY)基因cpy,观察其对毕赤酵母生长和外源蛋白表达的影响.方法 通过PCR方法扩增出内部含有潮霉素B抗性基因的cpy同源序列；通过电转法将同源序列转入GS115-EH感受态细胞中,并用潮霉素B筛选出阳性克隆.用平板显色法测定阳性克隆菌的羧肽酶活性,同时用PCR法鉴定阳性克隆菌的cpy基因是否缺失.对cpy基因缺失的GS115-EH△cpy菌,分别用YPD和BMGY-BMMY培养研究其生长特性；用BMMY培养基进行甲醇诱导表达外源蛋白,观察其蛋白表达的特性.结果 GS115-EH△cpy的羧肽酶基因cpy被成功敲除,羧肽酶活性丧失.YPD培养条件下,GS115-EH△cpy生长后期的D600明显低于GS115-EH,而用BMMY诱导培养基,GS115-EH△cpy的生长明显改善,但仍然低于对照菌.蛋白电泳结果显示甲醇诱导GS115-EH△cpy的蛋白表达量也低于对照菌.结论 GS115-EH△cpy的cpy基因被成功敲除,在YPD培养条件下,其生长低于对照菌,在BMMY培养条件下,其生长明显改善,但仍然较对照菌差,而且其外源蛋白的表达也低于对照菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴祖泽	天津大学化工学院	153	1469	18.0	31.0
5	王文文	天津大学化工学院	3	2	1.0	1.0
6	郝木强	北京工业大学生命科学与生物工程学院	1	1	1.0	1.0
7	刘春杰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	2	11	1.0	2.0
8	靳继德	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	22	69	5.0	7.0