一种降解赭曲霉毒素A的羧肽酶酶原在毕赤酵母中的表达

• 作者: 师磊 梁志宏 田晶晶 许文涛 黄昆仑
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 赭曲霉毒素A rProCPA 降解 毕赤酵母GS115
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 39-44
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2015.06.005

摘要

目的:获得能降解赭曲霉毒素A (ochratoxin A,OTA)的重组蛋白羧肽酶A(rCPA).方法:按照巴斯德毕赤酵母密码子偏爱性合成羧肽酶A酶原(ProCPA)基因,构建重组质粒pPIC9K/ProCPA,线性化后电转导入毕赤酵母GS115中,抗生素G418筛选获得高拷贝转化子.甲醇诱导表达5d,上清用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定.重组羧肽酶A酶原(rProCPA)用TPCK处理的胰蛋白酶酶解,酶解产物rCPA降解OTA,高效液相色谱(HPLC)测定降解率.结果:成功构建毕赤酵母重组菌株GS 115/pPIC9K/ProCPA.SDS-PAGE表明rProCPA分子质量与理论值一致,MALDI-TOF证实为牛胰脏ProCPA,甲醇诱导表达5d后上清的总蛋白含量190 mg/L.BandScan软件估计rProCPA占上清的80％,含量为150 mg/L.酶解产物rCPA能降解OTA,当OTA质量浓度为4μg/mL时,降解率为72.3％.HPLC显示有降解产物OTα产生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄昆仑	中国农业大学食品科学与营养工程学院	85	903	16.0	26.0
3	许文涛	中国农业大学食品科学与营养工程学院	109	782	15.0	23.0
5	梁志宏	中国农业大学食品科学与营养工程学院	39	212	8.0	13.0
8	师磊	中国农业大学食品科学与营养工程学院	2	6	2.0	2.0
9	田晶晶		1	2	1.0	1.0