利用TA克隆载体构建pET15b-SOD1重组质粒

• 作者: 丁鹏 杨波 王家宁 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 超氧化物歧化酶 TA克隆载体 基因重组 原核表达载体
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-68
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 3341字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2005.02.001

摘要

目的:利用pGEM-T Easy vector构建 pET15b-SOD1 重组质粒.方法: 以pBluescript II SK-SOD1质粒为模板, 应用pfu DNA 聚合酶,聚合酶链反应法(PCR) 扩增SOD1 cDNA.将扩增的SOD1 cDNA 与三磷酸脱氧腺苷(dATP) 反应,然后通过Taq DNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在SOD1 cDNA的3'末端加"A"并纯化,然后将纯化后的SOD1 cDNA与pGEM-T Easy vector直接连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,蓝白筛选,挑选白色克隆扩增、鉴定,重组的质粒命名为 pGEM-T Easy-SOD1.pGEM-T Easy-SOD1 和 pET15b 分别用Xho Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切, 采用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收所需片断,前者回收470 bp 的SOD1 cDNA片段,后者回收线性化的 pET15b 片段,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,抽提后的重组体质粒命名为pET15b-SOD1,然后对pET15b-SOD1进行酶切和核苷酸序列测序鉴定.结果:重组质粒pET15b-SOD1经测序分析证实:克隆入pET15b-SOD1的人SOD1 cDNA与GeneBank"AB087266"登录的人SOD1 cDNA序列一致,从而成功构建了pET15b-SOD1 重组质粒.结论:pET15b-SOD1重组质粒的构建为细胞穿透肽介导的SOD1转导提供了一对照载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨波		309	2088	20.0	31.0
2	王家宁	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
3	黄永章	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
4	丁鹏	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	8	54	3.0	7.0