小窝蛋白-1重组慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 董雷 蔡宛如 马春芳
• 来源期刊: 浙江医学
• 关键词: 小窝蛋白-1 重组慢病毒载体 急性肺损伤
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1477-1479,1485
• 页数: 4页
• 字数: 3132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12056/j.issn.1006-2785.2019.41.14.2018-2773

摘要

目的 构建小窝蛋白-1(Cav-1)重组慢病毒载体,并在293T细胞和小鼠中验证Cav-1过表达.方法 将Cav-1基因克隆至慢病毒载体GV287,然后利用酶切、PCR扩增鉴定、阳性克隆鉴定及测序验证构建Cav-1重组慢病毒.将Cav-1重组慢病毒转染至293T细胞,通过荧光检测慢病毒转染效果,采用Western blot法检测Cav-1蛋白表达情况,同时转染C57BL6小鼠,免疫组化法检测小鼠肺组织中Cav-1的表达情况.结果 经酶切、PCR扩增鉴定以及阳性克隆测序,提示Cav-1重组慢病毒构建正确.荧光检测显示转染Cav-1重组慢病毒后的293T细胞可见强荧光,Western blot法检测结果显示目的基因可表达,小鼠肺组织中Cav-1呈强阳性表达,且实时定量PCR检测Cav-1重组慢病毒滴度为1.3×1012copies/ml,达到可利用标准.结论 采用本研究方法可成功构建Cav-1重组慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡宛如	浙江中医药大学附属第二医院呼吸内科	62	480	12.0	19.0
2	马春芳	浙江中医药大学附属第二医院呼吸内科	9	47	3.0	6.0
3	董雷	浙江中医药大学附属第二医院呼吸内科	9	41	5.0	6.0