人肝脏特异性 miR -122重组慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 伍耀豪 周嘉嘉 张杰 曾乐祥 蒋雯丽 邓小耿 邓洁敏 邱荣林
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: miR-122 慢病毒 载体构建
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 169-173
• 页数: 5页
• 字数: 5005字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建microRNA－122（miR－122）的重组过表达慢病毒，并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定，为进一步研究miR－122的功能和作用机制奠定基础。方法利用PCR法扩增人类基因组DNA中miR－122发夹前体结构RNA，并将其克隆至PCDH－CMV－MCS－EF1a－GFP－puro慢病毒表达载体上，经酶切及基因测序鉴定，将阳性重组PCDH －CMV－miR－122－EF1a －GFP－puro 表达载体、pCMV －VSV －G 和pCMV －dR8.91三质粒共转染到HEK－293T细胞，收获上清液，将所得病毒悬液浓缩后梯度稀释后感染HEK－293T细胞，并利用绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定。将重组慢病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞，并利用实时定量PCR检测miR－122的表达。结果重组慢病毒表达载体PCDH－CMV－miR－122－EF1a－GFP－puro酶切及测序鉴定证明载体构建成功，并得到滴度为3×108 TU／mL的病毒液。病毒感染人皮肤成纤维细胞后miR－122表达明显增强。结论通过优化miRNA载体构建方法成功构建人miR－122的重组慢病毒载体并可在人类成纤维细胞内显著过表达miR－122，为miR－122的研究提供更高效稳定的基因载体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周嘉嘉	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	40	203	6.0	13.0
2	邓小耿	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	23	67	5.0	6.0
3	张杰	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	36	102	6.0	8.0
4	伍耀豪	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	13	31	4.0	5.0
5	曾乐祥	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	9	26	3.0	4.0
6	邓洁敏	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	2	1	1.0	1.0
7	邱荣林	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	7	15	3.0	3.0
8	蒋雯丽	中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科	3	8	1.0	2.0