PET32a-CDK2重组质粒的构建与表达

• 作者: 何敏 庄俊华 张战锋 陈炜烨 黄宪章
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: CDK2 重组质粒 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 页码范围: 681-684
• 分类号: R3
• 字数: 3456字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2011.06.001

摘要

目的 构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白.方法 从人白细胞中提取总RNA, 采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆.将克隆得到的PET32a-CDK2重组质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况.结果 菌落PCR及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出52 kD左右的蛋白.结论 成功构建重组质粒,并且CDK2全长蛋白在原核表达菌BL21中成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庄俊华	广东省中医院检验科	153	830	13.0	19.0
2	黄宪章	广东省中医院检验科	192	922	13.0	19.0
3	陈炜烨	广东省中医院检验科	17	88	6.0	8.0
4	何敏	广东省中医院检验科	26	125	6.0	9.0
5	张战锋	广东省中医院检验科	4	32	4.0	4.0