pPICZαA-CDK2重组质粒的构建及表达

• 作者: 何敏 庄俊华 张战锋 李朝霞 李林 谢诗园 陈炜烨 黄宪章
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞周期蛋白依赖激酶2 重组质粒 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2011,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2917-2919
• 分类号: R737.902
• 字数: 2544字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2011.16.012

摘要

目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白.方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆.重组质粒pPICZαA-CDK2转化毕赤酵母菌株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性.结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体中;重组质粒转入酵母菌GS115,酵母经甲醇诱导表达后经SDS-PAGE检测发现在34 000左右有条带,Western-Blot检测发现有与CDK2单抗结合蛋白.结论:成功构建重组质粒,初步判断CDK2全长蛋白在毕赤酵母中表达成功且抗原性良好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庄俊华	广东省中医院检验科	153	830	13.0	19.0
2	黄宪章	广东省中医院检验科	192	922	13.0	19.0
3	李朝霞	中山大学附属第三医院检验科	43	291	9.0	15.0
4	陈炜烨	广东省中医院检验科	17	88	6.0	8.0
5	李林	中山大学附属第三医院检验科	28	188	7.0	13.0
6	何敏	广东省中医院检验科	26	125	6.0	9.0
7	张战锋	广东省中医院检验科	4	32	4.0	4.0
8	谢诗园	广州医学院检验系	1	6	1.0	1.0