乙型肝炎病毒X基因原核表达载体的构建及蛋白表达

• 作者: 丁美 任锋 刘博玉 周育森 武志明 郭向华 靳海英
• 来源期刊: 中国医学检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 X基因 HBx蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 373-374,436
• 页数: 3页
• 分类号: R373.2+1
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建和表达乙型肝炎病毒X基因原核表达载体,获得重组HBx蛋白.[方法]用PCR方法扩增含有EcoR Ⅰ和HindⅢ酶切位点的X基因序列,分别以pMD18-T载体和pET32a(+)载体构建pMD18-T-HBX克隆载体和pET32a-HBX原核表达载体,随后把pET32a-HBX转化大肠杆菌BL-21进行诱导表达和纯化,Western blot检测原核表达的HBx蛋白的免疫活性.[结果]经IPTG诱导后可见分子量约38 KD的融合蛋白表达;表达的蛋白主要以包涵体形式存在;Western blot结果表明HBx融合蛋白具有较好的免疫活性.[结论]HBV X基因的克隆表达及其融合蛋白的纯化,为研究HCC患者血清中HBx蛋白和抗-HBx抗体滴度水平奠定了坚实的基础.