变形链球菌CH43变链素Ⅰ基因片段的克隆及表达

• 作者: 倪龙兴 田宇 石馨 邝容
• 来源期刊: 实用口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 变形链球菌 龋病 变链素 mutA 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 339-342
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3733.2005.03.013

摘要

目的:获得编码变形链球菌CH43变链素Ⅰ前体肽基因片段,并诱导其在不杀伤工程菌的前提下高效表达.方法:用PCR技术从变形链球菌CH43基因库中扩增出编码变链素Ⅰ成熟肽mutA基因片段相应大小的DNA片段,将片段与pMD18-T 载体连接后测序.将测序正确的mutA按照BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点克隆入原核表达载体pProEX,将连接产物转化入E.coli DH5α,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His 融合蛋白.以IPTG浓度、A600值、诱导时间各梯度优化表达.结果:PCR 获得的mutA序列与GenBank报道的一致(为147 bp).优化了诱导条件使重组载体在E.coli DH5α中高效表达,融合蛋白经SDS-PAGE,在相对分子质量为5.7×103 处有特异的蛋白条带,在A600为1.666时,加入IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,诱导6 h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白量的20%左右.结论:成功克隆变形链球菌CH43变链素ⅠmutA基因片段,并在E.coli DH5α中高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪龙兴	西安第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室	9	115	5.0	9.0
2	石馨	西安第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室	1	4	1.0	1.0
3	田宇	西安第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室	2	25	2.0	2.0
4	邝容	西安第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室	1	4	1.0	1.0