结核杆菌Hsp65与EGFP融合基因的构建及DC疫苗的制备

• 作者: 刘胜武 夏飞 肖凌 魏雅稚
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核杆菌 Hsp65 增强型绿色荧光蛋白 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91+1
• 字数: 3649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2005.01.004

摘要

目的: 构建结核杆菌H37Rv株Hsp65与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因pEGHsp65, 并以其转染小鼠的树突状细胞(DC), 制备抗结核的DC疫苗.方法: 采用PCR技术, 从培养的结核杆菌H37Rv株中抽提Hsp65基因, 克隆到含有EGFP基因的质粒pEGFP-C1中, 构建pEGHsp65融合基因.以其转染Hela细胞, 在共聚焦激光扫描荧光显微镜下观测不同时间荧光表达的强弱, 并用RT-PCR检测Hsp65 mRNA的表达.以pEGHsp65融合基因转染小鼠骨髓细胞经GM-CSF和IL- 4诱导分化的DC, 用MTT比色法检测DC疫苗刺激未致敏脾细胞的增殖.结果: 用EcoRⅠ和Bgl Ⅱ双酶切鉴定证实, H37Rv株Hsp65 DNA已插入重组表达载体pEGFP-C1中.将融合基因转染入Hela细胞, 48 h转染率最高; 用RT-PCR在mRNA水平上可检测到Hsp65 mRNA的表达.用MTT比色法检测表明, 融合基因转染的DC能激活并引起未致敏的脾细胞增殖.结论: 成功地构建pEGHsp65 融合基因和以其制备的DC疫苗, 为进一步观察其治疗结核病的效应奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘胜武	武汉大学医学院免疫学系	49	222	8.0	12.0
2	肖凌	武汉大学医学院免疫学系	5	24	2.0	4.0
3	魏雅稚	武汉大学医学院免疫学系	2	9	1.0	2.0
4	夏飞	武汉大学医学院免疫学系	5	34	3.0	5.0