结核分枝杆菌HSP65与IL-2融合蛋白的表达和纯化

• 作者: 师长宏 张海 徐志凯 柏银兰 王丽梅 薛莹 高辉
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 热休克蛋白65 白细胞介素2 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 801-804
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3217字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.09.001

摘要

目的 获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础.方法 用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序,将测序正确的目的基因片段分别经EcoRⅠ和ClaⅠ,ClaⅠ和HindⅢ双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EX Hta,转化大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,经IPTG诱导后进行融合表达,并通过镍柱对融合蛋白进行纯化.结果 PCR法扩增获得的各目的基因片段与GenBank报道的一致.构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE和Western-blot分析,在Mr 78000处有特异性的蛋白表达条带.用镍柱进行亲和层析纯化后得到了高纯度的HSP65-IL-2融合蛋白.结论 成功的构建了结核分枝杆菌HSP65与人IL-2的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,有望为结核的预防提供有效的疫苗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐志凯	第四军医大学微生物学教研室	216	1097	15.0	22.0
2	王丽梅	第四军医大学微生物学教研室	57	187	7.0	10.0
3	师长宏	第四军医大学微生物学教研室	145	694	13.0	16.0
4	柏银兰	第四军医大学微生物学教研室	79	325	11.0	13.0
5	薛莹	第四军医大学微生物学教研室	56	356	11.0	16.0
6	张海	第四军医大学微生物学教研室	87	511	12.0	18.0
7	高辉	第四军医大学微生物学教研室	21	79	6.0	7.0