牛分枝杆菌融合基因hsp65-esat6的原核表达及产物的纯化

• 作者: 云孟克 刘建东 刘思国 刘慧芳 周媛媛 宫强 常月红 王勇 王春来 赵昆 赵福广 迟磊
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛分枝杆菌 融合基因 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 223-226
• 页数: 4页
• 分类号: S8
• 字数: 3028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2007.03.011

摘要

以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导(终浓度为1 mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析.以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western-blot分析该融合蛋白的免疫活性.结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达.表达的融合蛋白裂解为两部分,即58 ku和30 ku,二者相加与预测大小88 ku相符.纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应.